【主要成分與含量】

【作用與用途】用于酶聯免疫吸附試驗，檢測犬血清中的抗狂犬病毒IgG抗體。

【用法與判定】

1  需要自備的材料

1.1  去離子水或生理鹽水

1.2  可調移液器

1.3  1000ml的量筒

1.4  酶標儀

1.5  37℃溫箱

2  預備步驟

2.1  血清滅活  將待檢樣品預先在56℃水浴中30分鐘進行熱滅活處理。

2.2  溫度平衡  實驗前將試劑盒從2～8℃冰箱取出，置室溫平衡30分鐘以上。

2.3  版面布置  做好質控陽性、質控陰性血清和待檢樣品的版面布置記錄。

2.4  質控陽性血清、質控陰性血清的稀釋  

用0.5ml樣品稀釋液復溶質控陽性血清和質控陰性血清，并作10倍系列稀釋至1:100。

2.5  待檢血清稀釋  將待檢血清10倍系列稀釋至1:100。

3  檢測步驟

3.1  加樣  將1:100稀釋的質控陽性血清、質控陰性血清和待檢樣品按照版面布置加入板孔內，100μl/孔，均作2孔重復。

3.2  孵育  將酶標板置于37℃恒溫培養箱內，孵育30分鐘。

3.3  洗板  用純化水將濃縮洗滌液進行20倍稀釋備用，棄掉板孔內液體，加洗滌液200μl/孔，洗滌5次，甩干。

3.4  加酶標抗體  用酶標抗體稀釋液按照1：100稀釋酶標抗體，100μl/孔。

3.5  孵育  將酶標板置于37℃恒溫培養箱內，孵育60分鐘。

3.6  洗板  棄掉孔內液體，加洗滌液200μl/孔，洗滌5次，甩干。

3.7  顯色  底物A、B液等體積混合，每孔加100ul。

3.8  孵育  將酶標板置于37℃恒溫培養箱內，避光孵育20min。

3.9  終止  每孔加終止液50μl，5分鐘內測定結果。

3.10  檢測  用酶標儀測定并記錄各孔在450nm波長處的吸光度（OD450nm）值。

4  結果判定

4.1  測有效性  當質控陽性血清OD450nm值≥0.6，質控陰性血清OD450nm值≤0.1，試驗有效。

4.2  檢測結果判定  待檢樣品OD450nm值≥質控陽性血清OD450nm值，認為待檢樣品血清抗體達到保護水平（0.5IU/ml），待檢樣品OD450nm值＜質控陽性OD450nm值，則認為待檢樣品血清抗體未達到保護水平（0.5IU/ml）。

【注意事項】

（1）本試劑盒僅用于檢測犬血清中狂犬病毒IgG抗體。

（2）不要使用過了有效期的試劑，不同批次試劑盒的成分不要混用。

（3）所有試劑2～8℃儲存，使用前所有的試劑需平衡至室溫。

（4）所有的試劑避免接觸皮膚和眼睛，如果碰到，立即用冷水沖洗接觸處。

（5）在樣品采集，儲存和運輸過程中避免污染。

（6）避免溶液被金屬離子、氧化劑和清潔劑污染，每個容器一定要清潔，對酶標記物和底物不要使用同一個容器和吸頭。

（7）檢測樣品預先進行熱滅活（56℃、30min），建議樣品在-20℃條件下保存。操作過程中的移液、時間和洗滌都必須精確控制。

（8）試劑盒開封后未用完的試劑盒，質控陰性和陽性血清應-20℃以下凍存，其余試劑應2～8℃保存，ELISA板條密封條件下2～8℃保存，可于1個月內用完。

【規格】96孔/盒

【貯藏與有效期】2~8℃保存，有效期為12個月。

【批準文號】獸藥生字031418122